Прием автокатализаторов: Прием катализаторов в Казани | Услуги

Содержание

Прием катализаторов в Казани — Пункт приема металлолома

Автомобильный катализатор является одной из ключевых частей выхлопной системы машины. Он также называется каталитический нейтрализатор и выполняет функцию уменьшения уровня неблагоприятных выбросов в воздух. Учитывая то, что автомобиль часто заправляют некачественным топливом, катализатор может быстро выходить из строя. На это влияют и его конструктивные особенности.

Многие выбрасывают данную деталь, забывая о том, сколько ядовитых веществ она накопила. Такое обращение может оказать негативное влияние на почву, воду и в целом окружающую среду. Позаботиться о природе и получить за это дополнительные деньги можно, если сдать катализатор (каталитический нейтрализатор) в пункт приема металлолома Втормет.

Предъявляемые требования к катализаторам

Те, кто хотят сдать данный элемент, должны знать об особенностях приема:

  • Сдаваемый элемент должен быть поделён на катализаторы и фильтры, из которых он состоит. Лучше предоставлять деталь в целом виде, так как это позволит произвести более точный анализ и обеспечит высшую стоимость, которую клиент может получить;
  • Лишние элементы стоит вынуть заранее. К ним относятся металлическая сетка, опилки, копоть, кварцевый песок, асбест, цемент и так далее.  Уровень природной влажности материала должен составлять 1-2%;
  • Носитель из металла должен быть цельным. В противном случае он теряет около половины ценного напыления, а значит уменьшает стоимость, которую клиент может получить за деталь. 

Важно знать: дизельные каталитические нейтрализаторы ценятся больше за счёт того, что в их состав входит больше платины. В бензиновых изделиях содержится больше палладия, который менее ценен. 

Как формируется стоимость?

Цена катализаторов в пункте приема металлолома образовывается за счет влияния нескольких факторов: 

  • объём двигателя авто. Чем больше данный критерий, тем больше в размерах катализатор, соответственно, выше цена. Стоит отметить, что размеры данной детали в авто от российского производителя несколько меньше, чем в импортных моделях. 
  • количество драгоценных металлов. Для определения наличия и соотношения палладия, золота, серебра и других элементов необходимо провести экспресс-анализ. 
  • целостность. Поврежденная деталь имеет меньшую стоимость.

В целом катализаторы отличаются друг от друга по форме, массе, структуре, взаимодействию с различными видами топлива. Все факторы формируют определенную цену при сдаче материала.

В нашем пункте приема металлолома «Втормет Казань» различают такие варианты:

  • сажевый фильтр;
  • керамика от зарубежных производителей;
  • российская керамика;
  • фольгированный носитель.

В нукте «Втормет Казань» вы можете сдать катализатор по выгодным ценам. Переработка полученных деталей происходит с помощью новейшего оборудования.

Компания предлагает максимально выгодные условия для клиентов, сотрудничая с физическими и юридическими лицами. Наша компания принимает нейтрализаторы в любом виде и с различным содержанием драгоценных материалов.

На первом этапе проводится химический анализ с применением инновационного оборудования. После выполняется переработка детали.

Кроме автомобильных нейтрализаторов наша компания принимает широкий спектр черного и цветного металлолома. Проверьте свой гараж на ненужный лом. Убеждены, найдется не один десяток килограммов металлолома.

Autokatrecycle — Сдача катализаторов

Перерабатываем

катализаторы

Autokat Recycle
Компания по приему и переработке
автомобильных катализаторов.
Делаем мир чище и безопаснее!

Сдать катализатор

Приём металлических

катализаторов

— BMW — 17 000 р./кг

— Импортные — 12 500 р./кг

— Отечественные — 4 500 р./кг
*только катализаторы определённого вида

При сдаче от 100 кг действуют особые условия,

уточняйте информацию у наших менеджеров

Оставить заявку

Теперь в Санкт-Петербурге

и области!

Выездные менеджеры готовы приехать к вам
7 дней в неделю! Звоните сейчас:
+7 (812) 445-81-54
В субботу и воскресенье пункт
переработки закрыт, приём
производится выездными
специалистами.

Оставить заявку

Команда выездных

менеджеров!

Оставьте заявку прямо сейчас. Наш специалист
свяжется с вами
и приедет в назначенное место.

Оставить заявку

Акция!

Для частных клиентов

Только с 9.00 до 14.00 по субботам

в пункте приема в Москве заплатим
+15% к стоимости
катализатора

Оставить заявку

Пламегасители в Санкт-Петербурге!

Теперь в пункте приема в Санкт-Петербурге

вы можете приобрести пламегасители
по низкой цене!


Подробности уточняйте у менеджера:
8 (965) 094-01-70
Звоните прямо сейчас!

Оставить заявку

Оптовик? Заявись!

Акция в Июне!

Специально для оптовых клиентов.
Работаем на особых условиях!

Чтобы узнать детали, свяжитесь с менеджером.

Действуйте прямо сейчас!

Оставить заявку

Скупка каталитических нейтрализаторов и сажевых фильтров от 1 шт.

Для физических лиц:

  • Покупаем каталитические нейтрализаторы только без корпуса, в целом или разбитом виде;
  • Для продажи каталитического нейтрализатора, физ. лицу при себе иметь паспорт;
  • С помощью РФА анализа осуществляем оценку стоимости нейтрализатора
  • Расчет за нейтрализаторы производим в рублях.
  • Для СТО и юридических организаций:

  • Покупаем нейтрализаторы только без корпуса, в целом или разбитом виде;
  • Предварительно, заключаем договор, доставляем в пункт приема
  • С помощью РФА анализа осуществляем оценку стоимости нейтрализатора
  • Осуществляем оплату за нейтрализатор по безналичному расчету
  • Автокатализаторы

    скупка катализаторов, купить катализатор, катализатор купить, катализаторы автомобильные, каталитический нейтрализатор, скупка автокатализаторов, покупка катализаторов, автокатализатор, покупка катализатора, покупка автокатализаторов, утилизация автомобильных катализаторов, прием катализаторов, катализаторы автомобильные куплю, сдать катализатор, купить платиновый катализатор, платина из катализатора, скупка катализаторов цена, скупка катализаторов в москве, скупка бу катализаторов, скупка автомобильных катализаторов, покупка отработанных катализаторов, катализаторы автомобильные б у, катализатор продать, куплю отработанные катализаторы, купить катализатор автомобильный, нейтрализаторы

    скупка катализаторов, купить катализатор, катализатор купить, катализаторы автомобильные, каталитический нейтрализатор, скупка автокатализаторов, покупка катализаторов, автокатализатор, покупка катализатора, покупка автокатализаторов, утилизация автомобильных катализаторов, прием катализаторов, катализаторы автомобильные куплю, сдать катализатор, купить платиновый катализатор, платина из катализатора, скупка катализаторов цена, скупка катализаторов в москве, скупка бу катализаторов, скупка автомобильных катализаторов, покупка отработанных катализаторов, катализаторы автомобильные б у, катализатор продать, куплю отработанные катализаторы, купить катализатор автомобильный, каталитические нейтрализаторы

    Скупка автокатализаторов

    скупка катализаторов, купить катализатор, катализатор купить, катализаторы автомобильные, каталитический нейтрализатор, скупка автокатализаторов, покупка катализаторов, автокатализатор, покупка катализатора, покупка автокатализаторов, утилизация автомобильных катализаторов, прием катализаторов, катализаторы автомобильные куплю, сдать катализатор, купить платиновый катализатор, платина из катализатора, скупка катализаторов цена, скупка катализаторов в москве, скупка бу катализаторов, скупка автомобильных катализаторов, покупка отработанных катализаторов, катализаторы автомобильные б у, катализатор продать, куплю отработанные катализаторы, купить катализатор автомобильный, каталитические нейтрализаторы

    • Покупка автокатализаторов
    • Скупка автокатализаторов
    • Прием автокатализаторов

    скупка катализаторов, купить катализатор, катализатор купить, катализаторы автомобильные, каталитический нейтрализатор, скупка автокатализаторов, покупка катализаторов, автокатализатор, покупка катализатора, покупка автокатализаторов, утилизация автомобильных катализаторов, прием катализаторов, катализаторы автомобильные куплю, сдать катализатор, купить платиновый катализатор, платина из катализатора, скупка катализаторов цена, скупка катализаторов в москве, скупка бу катализаторов, скупка автомобильных катализаторов, покупка отработанных катализаторов, катализаторы автомобильные б у, катализатор продать, куплю отработанные катализаторы, купить катализатор автомобильный, каталитические нейтрализаторы

    Как происходит прием катализаторов — Katalizator-group

    Как происходит переработка катализаторов

    Современные автомобили невозможно представить без каталических нейтрализаторов выхлопных газов, которые являются важнейшей частью эко-безопасности. Транспортные средства в обязательном порядке оснащаются преобразователями выхлопа, а после выхода устройств из строя нужно ответственно отнестись к их утилизации и переработке. С этой целью открываются пункты приема катализаторов, в которых доступно не только избавиться от нерабочего автоката, но и получить материальную выгоду.

    Многих интересует, как работает переработка катализаторов и сажевых фильтров, и какие этапы проходят б/у катализаторы, прежде чем из них удается получить драгоценные металлы.

    Процесс утилизации

    Главная цель производства по переработке автокатов – защита окружающей среды и добыча металлов платиновой группы, которые вступают в катализ с токсинами выхлопных газов и преобразуют их в нейтральные вещества.

    Внутренняя сотовая поверхность нейтрализаторов покрыта напылением платины, родия и палладия, которые в качестве катализаторов, вступают и ускоряют реакцию внутри нейтрализатора, но не расходуются в процессе этой реакции. Поэтому скупка б/у катализаторов выгодна обеим сторонам: продавцу и покупателю. Ведь в среднем с каждого ката можно получить до 4 г драгметаллов.

    Сортировка

    Но прежде чем отработанное устройство попадет в переработку, катализаторы сортируют по группам, а вернее по преобладанию в них того или иного платиноида. В основном каты делятся на те, что содержат больше платины и те, в которых преобладает палладий. Третий элемент – родий – редко оказывает влияние на процесс сортировки, так как его концентрация в общем объеме сырья ничтожно мала, и чтобы его добыть, нужно организовать температуру 1 960 градусов, что усложняет работу с родием.

    Гомогенизация

    Под гомогенизацией подразумевается измельчение сырья и его перемешивание до однородной массы. Неважно, в каком виде требуется сдать катализатор, в итоге его раздробят и перемелют. Затем нейтрализатор доведенный до однородного порошка взвешивают и отбирают пробу для проведения химического анализа. Эта процедура позволит определить концентрацию драгметаллов и различных примесей.

    Переработка пробы

    Любая погрешность в процессе отбора пробы недопустима и потому для этого процесса в нашей компании применяют надежное оборудование с повышенной точностью. И хотя процедура осуществляется механическим способом, эксперты внимательно следят за процессом. Ведь в дальнейшем ошибки исправить уже будет невозможно.

    Истирание пробы

    Вторичное сырье, полученное от переработки б/у катализаторов, помещают в специальное лабораторное устройство – истиратель, который превращает исходный материал в массу с высокой концентрацией, готовую к более точному XRF-анализу.

    Рентгенофлуоресцентный анализ

    Метод XRF-анализа применяется для точного определения массы драгметаллов платиновой группы в заданном объеме сырья. После того как переработанный катализатор побывает в анализаторе, специалисты нашей компании уже точно смогут назвать количество платиноидов в устройстве, сданное в скупку катализаторов.

    Расчет стоимости

    Последний этап – самый приятный для продавца, так как речь пойдет о том, сколько стоит б/у катализатор и какую за него дадут цену. На основе анализа и актуальной стоимости металла на мировой бирже, специалисты называют цену за б/у катализатор и выплачивают причитающуюся сумму. Расчет сопровождает подтверждающая документация, также можно получить сертификат, в котором будут указаны параметры взятой пробы.

    Методы добычи драгметаллов из нейтрализаторов

    В промышленных масштабах единовременно перерабатывается тысячи катализаторов и потому в этом процессе важно придерживаться определенной методики.

    На сегодняшний день применяется несколько способов переработки катализаторов:

    • аффинажная, при которой сырье растворяют в концентрате азотной кислоты
    • гидрохлорирование доступно только на производстве и подразумевает разделение сырья на металлы при помощи хлора с водой или диспергированного раствора.
    • Электромеханическая переработка подразумевает оксидирование, травление и прочее, но при этом способе попутно уничтожается олово, хром, свинец и алюминий, также входящие в состав катализатора.
    • При промышленной переработке катализаторов чаще всего применяют способ сжигания сырья в плазменно-дуговых печах при высокой температуре.

    Причины утилизации автокатализаторов

    Вышедшие из строя католические нейтрализаторы не рекомендуется оставлять на хранение в гараже или выбрасывать на свалку, так как эти устройства в процессе работы скапливают большое количество канцерогенов, которые при длительном распаде катализатора проникают в почву и воду, загрязняя окружающую среду.

    В процессе переработки катализаторов редким металлам платиновой группы дается «вторая жизнь», тем самым сохраняются природные богатства.

    Важно помнить, что автомобильный катализатор имеет ограниченный срок службы, варьирующийся в пределах 70-150 тысяч километров пробега, после чего его работа становится неэффективной и устройство требует замены.

    Наша компания предлагает оптимальные условия при скупке катализаторов, а главными преимущества считаются:

    • заинтересованность в каждом клиенте
    • «прозрачный» и точный анализ сырья
    • высокие цены
    • бесплатная консультация по всем вопросам
    • оперативность
    • пункты приема катализаторов в крупных городах РФ
    • разные способы доставки сырья в скупку
    • возможность выезда специалиста
    • выгодные условия для долгосрочного сотрудничества.

    Продать катализатор в скупку — это дополнительный доход и отличная идея для бизнеса.

     

    Прием автомобильных катализаторов — Втор-Групп

    Уточнить цену: 8 (846) 265-51-51

    Автомобильный катализатор (нейтрализатор) – часть выхлопной системы автомобиля, ответственная за фильтрацию выхлопных газов. Его задачей является уменьшение выбросов, получаемых при сгорании топлива, в атмосферу. Особенности конструкции устройства и низкокачественное топливо приводят к быстрому выходу из строя катализатора. В большинстве случаев старые катализаторы просто выбрасывают, не задумываясь что их можно выгодно продать.

    Компания ООО «Втор-Групп» предлагает Вам сдать старый неиспользуемый катализатор, ведь это не только правильно с точки зрения экологии, но ещё и выгодно. Мы скупаем новые и бывшие в употреблении автомобильные катализаторы.

    Предлагаемые клиентам цены выше средних, что обеспечивает наиболее взаимовыгодные условия сотрудничества.

    Катализаторы бывают нескольких видов:

    1. Керамические
    2. Металлические

    Цена на автомобильные катализаторы зависит от:

    1. Объёма двигателя. Чем он больше, тем дороже будет катализатор.
    2. Марки автомобиля. На катализаторы импортного производства цена выше.
    3. Предварительно разобран или нет.

    Прейскурант цен на катализаторы

    ОПИСАНИЕ ЦЕНА

    индивидуальная, зависит от марки авто, года выпуска и пробега

    Металлический РФ 2 000
    Металлический ИМПОРТ 5 000
    Керамический РФ 2 000
    Керамический ИМПОРТ от 2 000 до 10 000
    Сажевый фильтр от 500

     

    Цены на лом указаны с учетом доставки лома за счет Поставщика на производственно-заготовительный участок ООО «Втор-Групп» по адресу 443009, г. Самара, Советский район, ул. Калинина, участок 3. Взвешивание лома производится весовщиком, оформление приемо-сдаточных актов производится бухгалтером ООО «Втор-Групп» на территории производственно-заготовительного участка.

     

    Консультация: 8 (846) 265-51-51

    Прием катализаторов на Алмазной улице, Ростов-на-Дону — 1 место 📍 (адрес, фото)

    — 1 место

    • Мы составили рейтинг 1 места «прием катализаторов» на Алмазной улице;
    • Лучший прием катализаторов: уровень цен, отзывы, фото;
    • Прием катализаторов на карте: адреса, телефоны, часы работы;

    Лучший прием катализаторов — рейтинг, адреса и телефоны

    Запрос в заведения — закажите услугу, уточните цену

    Отправьте запрос — получите все предложения на почту:

    Интересные факты

    Чаще всего люди ищут «прием катализаторов», но встречаются и другие формулировки,
    например:

    • скупка катализаторов
    • куда сдать катализатор
    • покупка катализаторов
    • покупка б/у катализаторов
    • прием бу катализаторов

    Самые популярные особенности найденных мест: ремонт гидробортов, ремонт шрусов, стоянка такси, контрактные вариаторы, ремонт легковых прицепов, Toyota, Subaru, Daewoo, УАЗ, ВАЗ.


    Добавить бизнес — бесплатная реклама вашей организации на HipDir.

    ⭐ Прием и скупка катализаторов в Рязани

    Компания PriemKata выполняет прием сажевых фильтров, катализаторов на лучших условиях. Многолетний опыт в сфере переработки катализаторов помог нам учесть пожелания клиентов, чтобы предложить выгодное сотрудничество:

    • высокие, честные цены, основанные на котировках драгоценных металлов Лондонской биржи;
    • проведение современного анализа, дающего точные данные о содержании драгметаллов;
    • оплаты в день анализа;
    • выезд в удобное для Вас время и место

    Вы можете сдать в наш пункт приема б/у катализаторы с автомобилей как импортного, так и отечественного производства. Стоимость зависит от концентрации драгметаллов в его составе. На это влияет уровень износа, материал из которого сделан катализатор, страна производитель. Предварительно рассчитать цену можно при помощи нашего калькулятора. Мы сотрудничаем с физическими и юридическими лицами, проводя расчет наличным и безналичным способом. Индивидуальный подход, соблюдение сроков, анализ в присутствии клиента обеспечивают прозрачность и быстроту сделки.

    Скупка и прием катализаторов керамического и металлического типа, сажевых фильтров производится по следующей схеме:

    • вы привозите катализатор в наш пункт приема в г. Рязань, либо наши специалисты выезжают к Вам по городу и области;
    • далее проводим спектральный анализа содержания драг. металлов в катализаторе;
    • проводим оплату на основании данных анализа;
    • оплата проводится наличным либо безналичным способом.

    Мы обеспечиваем безопасное хранение, а также утилизацию автомобильных блоков, вносим посильный вклад в сохранение экологии и эргономического использования ресурсов. Не стоит выбрасывать отработанный нейтрализатор, лучше сдать его в скупку и получить двойную выгоду: пополнить бюджет и позаботится об окружающей среде.

    Выполняем бесплатное удаление катализаторов, установку пламогасителя и перепрошивку на евро 2 в счёт стоимости катализатора. В акции участвуют корейские и некоторые марки японских автомобилей. За отдельные виды автомобилей осуществляем доплаты. Другие марки автомобилей после осмотра и диагностики.

    IPA — Международная ассоциация металлов платиновой группы

    Автокатализатор — это цилиндр или эллиптическое поперечное сечение, изготовленное из керамики или металла, сформированное в виде мелких сот и покрытое раствором химикатов и комбинацией платины, родия и / или палладия. Он установлен внутри канистры из нержавеющей стали (весь узел называется каталитическим нейтрализатором) и установлен в выхлопной трубе автомобиля, где он преобразует загрязнители, образующиеся при сгорании топлива, в безвредные газы.

    В каталитической системе для бензиновых двигателей при прохождении выхлопных газов через устройство автокатализатор преобразует газообразные углеводороды, CO и NO x в воду, CO 2 и азот. В каталитической системе для дизельных двигателей дополнительно используется фильтр для удаления мелких частиц (сажи), которые являются серьезной причиной заболеваний легких и сердечно-сосудистых заболеваний. Фильтр улавливает эти частицы и обычно покрыт МПГ, чтобы помочь сжечь их и регенерировать фильтр.

    Дизельные двигатели работают при более низких температурах, чем бензиновые, и работают с более бедным газовым потоком, содержащим много кислорода.В этих условиях платина является более активным катализатором превращения CO и углеводородов в безвредные выбросы. Однако добавление палладия к платиновому катализатору может улучшить его термическую стабильность. Это преимущество при уменьшении выбросов твердых частиц дизельного топлива в выхлопных газах. Этот процесс включает улавливание твердых частиц или сажи фильтром с последующим повышением температуры системы для окисления сажи до CO 2 . При этих более высоких температурах палладий улучшает термическую стойкость катализатора, помогая ему работать оптимально в течение всего срока службы автомобиля.

    Без PGM желаемые реакции конверсии в каталитическом нейтрализаторе не имели бы места, в результате чего транспортное средство не соответствовало бы нормам выбросов. Были опробованы и другие материалы, но они не отвечали долгосрочным требованиям к активности и долговечности современных систем контроля выбросов.

    Активность МПГ ​​позволяет реакциям происходить в условиях низких температур, которые существуют при холодном запуске транспортного средства, когда выбросы наиболее высоки. Долговечность важна, поскольку каталитические нейтрализаторы должны работать в течение всего срока службы автомобиля.Это также означает, что при утилизации автомобиля драгоценный металл, содержащийся в каталитическом нейтрализаторе, доступен для вторичной переработки, создавая ценный дополнительный источник добычи для производства новых автокатализаторов.

    Правильная классификация и идентификация автокатализа

    Принято считать, что автокатализ — это кинетическое явление, при котором продукт реагирующей системы действует как катализатор. Следовательно, реакция протекает быстрее при добавлении соответствующего продукта к непрореагировавшей смеси реагентов, что дает однозначную возможность того, как система может быть идентифицирована экспериментально или теоретически как автокатализ.После утверждения это часто приводит к сигмоидальным профилям концентрация-время, хотя это не является ни необходимым, ни достаточным предварительным условием, поскольку должны быть соблюдены соответствующие механистические и параметрические условия, чтобы вызвать появление этой кинетической особенности. Несколько кинетических моделей типа массового воздействия, дающие сигмоидальные профили концентрация-время, систематически анализируются, чтобы уточнить их правильную характеристику и классификацию. Эта процедура позволила нам уточнить определения автокатализа и автокатализатора.Кинетическое явление, при котором продукт общего химического события служит катализатором по крайней мере для одной из ее подсистем или для самой системы в целом, называется автокатализом. Это определение проясняет, что в случае автокатализа концентрация автокатализатора обязательно увеличивается в ходе любой реальной общей химической или биохимической реакции. Таким образом, способ, которым это достигается, обеспечивает подходящий инструмент для классификации автокаталитических процессов по их выясненным и точным механистическим деталям.

    У вас есть доступ к этой статье

    Подождите, пока мы загрузим ваш контент…

    Что-то пошло не так. Попробуй еще раз?

    % PDF-1.4
    %
    1 0 объект
    >
    эндобдж
    4 0 obj
    (\ 376 \ 377 \ 000 \ 124 \ 000 \ 150 \ 000 \ 145 \ 000 \ 040 \ 000 \ 117 \ 000 \ 162 \ 000 \ 151 \ 000 \ 147 \ 000 \ 151 \ 000 \ 156 \ 000 \ 040 \ 000 \ 157 \ 000 \ 146 \ 000 \ 040 \ 000 \ 114 \ 000 \ 151 \ 000 \ 146 \ 000 \ 145)
    эндобдж
    5 0 obj
    >
    эндобдж
    8 0 объект
    (\ 376 \ 377 \ 000 \ 101 \ 000 \ 156 \ 000 \ 040 \ 000 \ 122 \ 000 \ 116 \ 000 \ 101 \ 000 \ 040 \ 000 \ 167 \ 000 \ 157 \ 000 \ 162 \ 000 \ 154 \ 000 \ 144)
    эндобдж
    9 0 объект
    >
    эндобдж
    12 0 объект
    (\ 376 \ 377 \ 000 \ 120 \ 000 \ 162 \ 000 \ 145 \ 000 \ 142 \ 000 \ 151 \ 000 \ 157 \ 000 \ 164 \ 000 \ 151 \ 000 \ 143 \ 000 \ 040 \ 000 \ 155 \ 000 \ 145 \ 000 \ 164 \ 000 \ 141 \ 000 \ 142 \ 000 \ 157 \ 000 \ 154 \ 000 \ 151 \ 000 \ 163 \ 000 \ 155)
    эндобдж
    13 0 объект
    >
    эндобдж
    16 0 объект
    (\ 376 \ 377 \ 000 \ 106 \ 000 \ 162 \ 000 \ 157 \ 000 \ 155 \ 000 \ 040 \ 000 \ 122 \ 000 \ 116 \ 000 \ 101 \ 000 \ 040 \ 000 \ 164 \ 000 \ 157 \ 000 \ 040 \ 000 \ 160 \ 000 \ 162 \ 000 \ 157 \ 000 \ 164 \ 000 \ 145 \ 000 \ 151 \ 000 \ 156 \ 000 \ 163 \ 000 \ 040 \ 000 \ 141 \ 000 \ 156 \ 000 \ 144 \ 000 \ 040 \ 000 \ 104 \ 000 \ 116 \ 000 \ 101)
    эндобдж
    17 0 объект
    >
    эндобдж
    20 0 объект
    (\ 376 \ 377 \ 000 \ 101 \ 000 \ 040 \ 000 \ 163 \ 000 \ 143 \ 000 \ 145 \ 000 \ 156 \ 000 \ 141 \ 000 \ 162 \ 000 \ 151 \ 000 \ 157 \ 000 \ 040 \ 000 \ 146 \ 000 \ 157 \ 000 \ 162 \ 000 \ 040 \ 000 \ 164 \ 000 \ 150 \ 000 \ 145 \ 000 \ 040 \ 000 \ 157 \ 000 \ 162 \ 000 \ 151 \ 000 \ 147 \ 000 \ 151 \ 000 \ 156 \ 000 \ 040 \ 000 \ 157 \ 000 \ 146 \ 000 \ 040 \ 000 \ 154 \ 000 \ 151 \ 000 \ 146 \ 000 \ 145)
    эндобдж
    21 0 объект
    >
    эндобдж
    24 0 объект
    (\ 376 \ 377 \ 000 \ 101 \ 000 \ 165 \ 000 \ 164 \ 000 \ 157 \ 000 \ 143 \ 000 \ 141 \ 000 \ 164 \ 000 \ 141 \ 000 \ 154 \ 000 \ 171 \ 000 \ 164 \ 000 \ 151 \ 000 \ 143 \ 000 \ 040 \ 000 \ 123 \ 000 \ 145 \ 000 \ 164 \ 000 \ 163)
    эндобдж
    25 0 объект
    >
    эндобдж
    28 0 объект
    (\ 376 \ 377 \ 000 \ 101 \ 000 \ 165 \ 000 \ 164 \ 000 \ 157 \ 000 \ 143 \ 000 \ 141 \ 000 \ 164 \ 000 \ 141 \ 000 \ 154 \ 000 \ 171 \ 000 \ 164 \ 000 \ 151 \ 000 \ 143 \ 000 \ 040 \ 000 \ 123 \ 000 \ 145 \ 000 \ 164 \ 000 \ 163 \ 000 \ 040 \ 000 \ 141 \ 000 \ 156 \ 000 \ 144 \ 000 \ 040 \ 000 \ 164 \ 000 \ 150 \ 000 \ 145 \ 000 \ 040 \ 000 \ 117 \ 000 \ 162 \ 000 \ 151 \ 000 \ 147 \ 000 \ 151 \ 000 \ 156 \ 000 \ 040 \ 000 \ 157 \ 000 \ 146 \ 000 \ 040 \ 000 \ 114 \ 000 \ 151 \ 000 \ 146 \ 000 \ 145)
    эндобдж
    29 0 объект
    >
    эндобдж
    32 0 объект
    (\ 376 \ 377 \ 000 \ 123 \ 000 \ 165 \ 000 \ 155 \ 000 \ 155 \ 000 \ 141 \ 000 \ 162 \ 000 \ 171 \ 000 \ 040 \ 000 \ 141 \ 000 \ 156 \ 000 \ 144 \ 000 \ 040 \ 000 \ 117 \ 000 \ 165 \ 000 \ 164 \ 000 \ 154 \ 000 \ 157 \ 000 \ 157 \ 000 \ 153)
    эндобдж
    33 0 объект
    >
    эндобдж
    36 0 объект
    (\ 376 \ 377 \ 000 \ 101 \ 000 \ 143 \ 000 \ 153 \ 000 \ 156 \ 000 \ 157 \ 000 \ 167 \ 000 \ 154 \ 000 \ 145 \ 000 \ 144 \ 000 \ 147 \ 000 \ 155 \ 000 \ 145 \ 000 \ 156 \ 000 \ 164 \ 000 \ 163)
    эндобдж
    37 0 объект
    >
    эндобдж
    40 0 obj>
    поток
    x ڥ Xms6_oGE0 @ | 9> n69 ۝ \ ۙ HHBM * _ ~ KY4371vo * q $ u s4PJ2 ~] $ lotr \} N6ₓ: b1J & 9 # [/ [.1`! 5 [q8X ,?

    Принципы построения автокаталитических циклов ограничивают кинетику ферментов и вызывают низкое насыщение субстрата в точках ветвления потока

    Простая модель предполагает, что как автокаталитические, так и ответвленные реакции необратимы. Здесь мы предполагаем, что реакция разветвления обратима, и пусть Y обозначает ее продукт. Для простоты мы также предполагаем, что Keq = 1, отмечая, что это предположение всегда может быть выполнено путем измерения концентрации Y в единицах Keq⁢X. Напомним, что обратимое уравнение Михаэлиса-Ментен утверждает, что:

    fb = Vmax, b⁢ (X-Y) KX + X + KXKY⁢Y

    Мы предполагаем, что третья реакция, fc, необратимо потребляет Y.Хотя предположение, что fc следует необратимой кинетике Михаэлиса-Ментен, аналитически поддается анализу, анализ проще и информативен, если предположить, что fc = D⁢Y для некоторой константы D. Это упрощение эквивалентно предположению, что fc следует кинетике Михаэлиса-Ментен с Vmax. , cKM, c≈D и Vmax, c >> max (Vmax, a, Vmax, b).

    Начнем с определения необходимых условий существования устойчивого состояния. Поскольку в установившемся режиме fa = fc, отсюда следует, что:

    (27)

    Vmax, a⁢X * KM, a + X * = D⁢Y * ⇒Y * = Vmax, aD⁢X * KM, a + X *

    Кроме того, как и в установившемся режиме fa = fb, получаем:

    Vmax, a⁢X * KM, a + X * = Vmax, b⁢ (X * -Y *) KX + X * + KXKY⁢Y *

    Замена Y * из уравнения 27 дает:

    Vmax, a⁢X * KM, a + X * = Vmax, b⁢ (X * -Vmax, aD⁢X * KM, a + X *) KX + X * + KXKY⁢Vmax, aD⁢X * KM, a + X *

    Что выполняется, когда X * = 0 (подразумевая, что X * = Y * = 0 является устойчивым состоянием), или когда X * удовлетворяет квадратному уравнению:

    0 = (X ∗) 2 + 2KM, aVmax, b− (KM, a + KX) Vmax, a − KXVmax, a2KYD − Vmax, aVmax, bDVmax, b − Vmax, aX ∗ + KM, a (Vmax, bKM, a − Vmax, aKX − Vmax, aVmax, bD) Vmax, b − Vmax, a

    Это квадратное уравнение, хотя и пугающее, можно использовать для вывода условий существования положительного установившегося состояния.Только если оба корня этого уравнения отрицательны, положительного устойчивого состояния не существует. Напомним, что два корня квадратного уравнения вида 0 = a⁢X2 + b⁢X + c отрицательны тогда и только тогда, когда:

    {b = 2KM, aVmax, b− (KM, a + KX) Vmax, a − KXVmax, a2KYD − Vmax, aVmax, bDVmax, b − Vmax, a> 0c = KM, a (Vmax, bKM, a − Vmax, aKX − Vmax, aVmax, bD) Vmax, b − Vmax, a> 0

    Как и в необратимом случае, знак Vmax, b-Vmax, a определяет необходимое условие для числителей. Мы предполагаем, что Vmax, b> Vmax, a, отмечая, что если Vmax, b Vmax, b, система будет расходиться независимо от значение Y.

    В предположении, что Vmax, b> Vmax, a, знаменатель как b, так и c положительный, что означает, что положительное установившееся состояние существует только в том случае, если номинаторы b или c (или обоих) отрицательны. Таким образом, могут возникнуть два варианта.

    • Если KM, a> Vmax, a / D (подразумевая D> Vmax, a / KM, a, качественно предполагая быстрое удаление Y), то существует верхняя граница для Vmax, b, выше которой два решения отрицательны, подразумевая отсутствие положительного устойчивого состояния. Достаточным условием существования в этом случае является то, что Vmax, bKX

    • Если D Vmax существует a, c <0, что означает положительное установившееся состояние. Как будет показано ниже, в этом случае как при Vmax, b → Vmax, a, так и при Vmax, b → ∞, установившееся состояние является устойчивым.

    Теперь перейдем к анализу стабильности устойчивого состояния. Чтобы установившееся состояние было устойчивым, собственные значения матрицы Якоби должны иметь отрицательные действительные значения.В нашей системе это

    X˙ = fa-fbY˙ = fb-fc

    Мы используем следующие обозначения:

    α = d⁢fad⁢X = Vmax, a⁢KM, a (KM, a + X) 2βx = ∂⁡fb∂⁡X = Vmax, b⁢ (KX + Y⁢ (1 + KXKY)) (KX + X + KX⁢YKY) 2βy = ∂⁡fb∂⁡Y = -Vmax, b⁢ (KX + X⁢ (1 + KXKY)) (KX + X + KX⁢YKY) 2d⁢fcd⁢Y = D

    Мы можем использовать это обозначение, чтобы записать матрицу Якоби как:

    J = (α-βx-βyβxβy-D)

    , что дает характеристический полином:

    (α-βx-λ) ⁢ (βy-D-λ) + βy⁢βx = 0

    Чтобы действительные значения корней характеристического полинома были отрицательными, необходимо, чтобы b> 0 и c> 0, где b и c теперь являются коэффициентами квадратного уравнения a⁢λ2 + b⁢λ + c = 0.Таким образом, получаем:

    {b = βx − α − βy + D> 0c = (α − βx) (βy − D) + βyβx = βxD + αβy − αD> 0

    Обозначим через f * стационарный поток в системе, такой что f * = fa = fb = fc. Отметим, что для кинетики ММ и положительных концентраций справедливо:

    α> 0βx> 0 − βy> βxβx + βy = −f ∗ 1 + KXKYKX + X + KXYKY

    Во-первых, отметим, что если α≥βx, то установившееся состояние не может быть устойчивым, поскольку, глядя на значение c, мы видим, что в таком случае (βx − α) D <0 и поскольку αβy <0, c <0 нарушение условий устойчивости.Однако, поскольку мы предполагаем, что Vmax, b> Vmax, a, то для Y = Y *, при X = 0, fb фа. Из этого следует, что, поскольку два потока могут пересекаться только один раз для положительного X и фиксированного Y, в точке установившегося состояния, где fa = fb, α <βx, поэтому это условие выполняется. Отметим, что этого условия достаточно для того, чтобы b> 0. Мы также отмечаем, что поскольку α <βx, существует достаточно большое значение D, при котором установившееся состояние является стабильным, делая вывод, что если D достаточно велико, то устойчивое установившееся состояние существует, если:

    {Vmax, b> Vmax, aVmax, bKX

    Если D мало, такое, что D Vmax, a (подразумевая, что α <βx), нам нужно проверить, какие еще условия необходимы, чтобы гарантировать, что βxD + αβy − αD> 0.Смотрим на предел Vmax, b → ∞. В этом пределе квадратное уравнение для X * сходится к:

    0 = (X ∗) 2+ (2KM, a − Vmax, aD) X ∗ + KM, a2 − Vmax, aKM, aD

    Для этого уравнения c <0, что означает, что один из корней отрицательный, а другой положительный. Положительный корень:

    X * = Vmax, aD-KM, a

    Поскольку это X * конечно, мы получаем, что когда Vmax, b → ∞, Y * также сходится к Vmax, aD-KM, a. В этом пределе βx бесконечно увеличивается, а βy бесконечно убывает, но βx + βy сходится к:

    -f * ⁢ (1 + KXKY) KX + (Vmax, aD-KM, a) ⁢ (1 + KXKY)

    , что постоянно.Следовательно, переставив c так, чтобы:

    c = (βx + βy) D − βy (D − α) −αD> 0

    отметим, что по мере увеличения Vmax, b доминирующий член становится −βy (D − α)> 0, обеспечивая c> 0 и, следовательно, стабильность.

    С другой стороны, когда Vmax, b → Vmax, a, мы отмечаем, что поскольку fc 0, так что снова сохраняется стабильность.

    Следовательно, для малых значений D, пока Vmax, b> Vmax, a, существует положительное устойчивое установившееся состояние как в нижнем пределе Vmax, b → Vmax, a, так и в верхнем пределе Vmax, b → ∞.

    Таким образом, наши выводы таковы: Как и в необратимом случае, Vmax, b> Vmax, a является необходимым условием для существования глобально устойчивого устойчивого состояния. При больших значениях D обратимая реакция далека от равновесия, что приводит к дополнительному условию, эквивалентному условию, которое мы получили для необратимого случая, а именно, что Vmax, b / KX ограничено сверху членом, большим, чем Vmax, a / KM, a, но приближается к нему с увеличением D.Этого условия достаточно для существования и устойчивости стационарного состояния. Для малых значений D всегда существует установившееся состояние (при условии, что Vmax, b> Vmax, a). Мы можем показать, что это установившееся состояние устойчиво как при Vmax, b → ∞, так и при Vmax, b → Vmax, a. Таким образом, мы заключаем, что в этом случае не применяются никакие дополнительные ограничения на KX, KY или KM, a, а скорее, что установившееся состояние всегда может быть достигнуто в лучшем случае путем изменения Vmax, b.

    Качественно, случаи, которые мы анализируем, показывают, что помимо требуемого Vmax, b> Vmax, условие, второе условие состоит в том, что либо наклон fc = D меньше, чем Vmax, a / KM, a, либо максимальный наклон fb, Vmax, b / KX, меньше, чем Vmax, a / KM, a.

    дарвиновских свойств и их компромиссов в автокаталитических реакционных сетях РНК

    Материалы

    Во всех экспериментах использовалась вода, свободная от ДНКазы / РНКазы (номер продукта Thermo Fisher Scientific: 10977035). Химические вещества были приобретены у Sigma – Aldrich, если не указано иное. 4- (2-Гидроксиэтил) -1-пиперазинпропансульфоновая кислота (EPPS) была приобретена у Alfa Aesar (номер продукта: J60511, номер CAS: 16052-06-5). Денатурирующие полиакриламидные гели (12%) получали с использованием маточного раствора геля (Roth, Продукт №: A431.1) и запустить в 1X трис-боратном буфере EDTA (TBE). Олигонуклеотиды ДНК / РНК (дополнительные данные 1) были получены из ДНК-технологий IDT.

    Пакеты программ

    Обработка и анализ данных секвенирования выполнялись с использованием специального программного обеспечения, написанного на Python 2.7.16. Композиционный пейзаж (рис. 1d) был подготовлен с использованием программы «Circos» 48 (версия 0.69-6).

    Экспериментальные методы

    Транскрипция РНК

    РНК транскрибировали in vitro, как описано в ссылке. 31 . В матрице дцДНК для фрагментов WXY IGS дублируется в положении 25, чтобы позволить идентификацию путем секвенирования. Это осуществляется посредством сайт-направленного мутагенеза и получения плазмид, несущих соответствующий IGS, дублированный в 25-м положении (см. Дополнительные методы «Дублирование IGS»). Для ПЦР плазмиды (25 пг / мкл) смешивали с 0,5 мкМ соответствующих праймеров (Oligo 1–4 и 6–9, дополнительные данные 1) в качестве прямого и обратного праймеров в 1 × буфере для ПЦР (Thermo Scientific), 0,2 мМ. дНТФ, 0.01 Ед / мкл полимеразы (Thermo Scientific Phusion Hot Start II, номер продукта: F459), используя следующий протокол: начальная денатурация 98 ° C / 30 секунд, затем 25 циклов денатурации 98 ° C / 10 секунд, отжиг и удлинение 57 ° C / 1 мин и окончательное удлинение до 72 ° C / 5 мин. Продукты ПЦР осаждали этанолом путем добавления 1/10 объема 3 М Na-Ac и 1,2 объема 100% этанола к реакции ПЦР и центрифугирования при 13,6 × г в течение 60 мин при 4 ° C. Гранулы сушили в вакууме, ресуспендировали в 20 мкл воды и использовали для реакций транскрипции in vitro, как описано в ссылке. 31 . РНК экстрагировали фенол-хлороформ-изоамиловым спиртом, обрабатывали ДНКазой I (Thermo Fisher Scientific, номер продукта: EN0521) и очищали на полиакриламидных гелях. Концентрации РНК измеряли с использованием набора Qubit® RNA HS Assay Kit (Thermo Scientific, номер продукта: Q32852). Используемая здесь РНК-фрагмент Z была синтезирована (очищена в ПААГ) с помощью технологий ДНК IDT и использована без дополнительной очистки.

    Микрожидкостные устройства и установка

    В капельно-микрофлюидных экспериментах использовалось фторированное масло HFE 7500 (3M TM Novec TM , Product No.: 98-0212-2928-5) и фторсодержащее ПАВ (РАН Биотехнологии, № продукта: 008-Фторсурфактант). Устройства были разработаны с использованием программного обеспечения AutoCAD (Дополнительные данные 3), напечатанного в Selba SA. Устройства PDMS (полидиметилсилоксан) изготавливали методом мягкой литографии, как описано в ссылке. 49 . Для электрокоалесценции использовали стеклянные предметные стекла, покрытые оксидом индия и олова (Delta Technologies, номер продукта: CG-90IN-S215), с каналами, содержащими 3 M жидкие электроды NaCl 50 . После связывания плазмой каналы делали гидрофобными путем их немедленной промывки 2% 1H, 1H, 2H, 2H-перфтордецилтрихлорсиланом (ABCR, Product No.: AB111155) в HFE 7500 с помощью шприца. Микрофлюидные эксперименты на основе капель были выполнены с использованием инвертированного микроскопа (Nikon Eclipse Ti ), как описано ранее 51 . Потоки контролировали либо шприцевыми насосами (Harvard Apparatus Inc.), либо насосами для регулирования давления воздуха (MFCS ™ -EZ, Fluigent SA).

    Капельно-микрофлюидные эксперименты

    Полная экспериментальная система состоит из этапов A E (дополнительный рисунок 1): ( A ) Производство исходных эмульсий : Использование всех возможных 16 фрагментов РНК WXY ( gMg WXY cNu ), 24 уникальных различных комбинации фрагментов WXY были приготовлены в отдельных пробирках (дополнительная таблица 1 и раздел методов «Начальные комбинации фрагментов WXY»).Экспериментально для каждой комбинации 1 мкМ соответствующего фрагмента (ов) WXY нагревали при 80 ° C в течение 3 минут и охлаждали до комнатной температуры в течение 10 минут (0,1 ° C / сек) и смешивали с шпилькой-репортером РНК до конечной концентрации. 0,03 мкМ. Все 24 смеси были инкапсулированы индивидуально в 5 мкл капель с использованием фокусировки потока 52 на устройстве для создания капель (дополнительные данные 3) с использованием скорости потока 100–150 мкл / ч для водного раствора (РНК) и 150–170 мкл / ч для раствора. фазы масла (HFE 7500 с 2% поверхностно-активного вещества) (частота образования капель 5–10 кГц), каждая эмульсия собирается в течение 5 мин, что соответствует инкапсулированию ~ 10 мкл раствора РНК.Все 24 эмульсии собирали вместе в пробирку для сбора 1,5 мл (с колпачком из PDMS), содержащую масло с 2% поверхностно-активного вещества, и тщательно перемешивали. 1,6 мкМ раствор фрагмента Z-РНК в 1 × реакционном буфере Azoarcus (30 мМ EPPS, pH 7,4, 20 мМ MgCl 2 ) складывали таким же образом, как и РНК WXY, и инкапсулировали в капельки по 50 мкл с использованием 50 мкл Устройство для создания капель pL (дополнительные данные 3), при скорости потока 350 мкл / ч для водной (РНК) и 250 мкл / ч для масляной (HFE 7500 с 2% поверхностно-активного вещества) фаз, капли собираются в 0.Пробирка для сбора 5 мл (с крышкой из PDMS). Все потоки приводились в действие шприцевыми насосами. ( B ) Электрокоалесценция исходных эмульсий: 5 мкл капель (содержащих фрагменты WXY) и 50 мкл капель (содержащих Z-фрагмент и реакционный буфер) повторно вводили в отдельные каналы устройства для слияния капель (дополнительные данные 3). Капли 5 мкл и 50 мкл были распределены с использованием масла HFE 7500, содержащего 2% поверхностно-активного вещества, и собраны вместе в один канал, где они были электрически объединены 34,50 с использованием электрического поля переменного тока (генератор сигналов Agilent 33522 A, синусоидальная функция, 4 кГц, 400 мВ, 50 Ом) усилены в 10 3 раза (высоковольтный усилитель ТРЕК).Потоки регулировали таким образом, чтобы в среднем от одной до пяти капель объемом 5 мкл сливались с одной каплей объемом 50 мкл с частотой слияния ~ 150 Гц (дополнительный фильм 1). Это привело к ~ 1/10 разбавлению концентрации РНК WXY в слитых каплях (Z-фрагмент находится в стехиометрическом избытке). Все потоки приводились в действие системой контроля давления (MFCS ™ -EZ, Fluigent SA), а желаемая частота сварки достигалась путем тщательной регулировки и объединения потоков со значениями давления 380–400, 350–380, 470–520 мбар на 50 мбар. 1 мкл капельной эмульсии, 5 мкл капельной эмульсии и масляный канал спейсера соответственно.Электрокоалесценция и сбор (в пробирке на 0,2 мл с крышкой из ПДМС) проводили в течение ~ 3,5 ч, и эмульсии хранили на льду в течение всего процесса. Чтобы отслеживать частоту слияния во время сбора, события слияния подсчитывались по видеозаписям, записываемым каждые 20 минут, показывая очень стабильную частоту слияния, близко сопоставимую с той, которая была получена при секвенировании репортеров шпилечной РНК (дополнительный рис. 4). ( C ) Инкубация и расщепление капель : После сбора слитые капли инкубировали при 48 ° C в термоблоке в течение 1 часа, чтобы обеспечить накопление рибозимов.Чтобы разбавить MgCl 2 во время стадии обратной транскрипции (RT), эти капли (~ 60–65 мкл) были повторно введены (разделены маслом HFE 7500, содержащим 2% поверхностно-активного вещества) и разделены устройством с Т-образным соединением 53 (дополнительные данные 3) на более мелкие капли (~ 5 мкл) перед этапом RT. Скорость потока поддерживалась с использованием давления 800–1000 мбар и 150–250 мбар, соответственно, для канала маслоотделителя и впуска капель, в результате чего частота капель составляла ~ 150 Гц. ( D ) Штрих-кодирование капель и ОТ в каплях: Для секвенирования РНК в каждой разделенной капле мы разработали стратегию комбинирования штрих-кодирования капли и ОТ в каплях, вдохновленную методами транскриптомики отдельной клетки, описанными ранее 35 .Здесь гранулы гидрогеля со штрих-кодом индивидуально инкапсулируются в капельки со всеми необходимыми реагентами для RT и сливаются с сеткой РНК, содержащей капли. Подробности каждого этапа следующие: (a ) Синтез гранул гидрогеля со штрих-кодом: Гранулы гидрогеля получали совместным инкапсулированием 10% (масс. / Масс.) Диакрилата полиэтиленгликоля (PEG-DA) 6000 (Sigma, номер продукта: 701963), 1% (мас. / Мас.) PEG-DA-700 (Sigma, номер продукта: 455008), 400 мкМ модифицированной акридитом дцДНК с липким концом из 4 оснований (олиго 10, вверху, несущий 5′- модификация акридита и Oligo 11, внизу, дополнительные данные 1), 10 мкМ FITC-Na (флуоресцеин изотиоцинат), 1% (об. / об.) фотоинициатора (2-гидрокси-2-метилпропиофенон, Sigma, Product No.: 405655) в буфере (75 мМ Trizma-HCl pH 7,4, 50 мМ NaCl) с использованием фокусировки потока 52 на устройстве dropmaker (дополнительные данные 3). Было получено 9 мкл капель с использованием потоков 150 мкл / ч для водного раствора и 500 мкл / ч для масла (HFE 7500 с 2% поверхностно-активного вещества). Капли полимеризовали УФ-облучением (UV omnicure AC475-365, Lumen Dynamics, экспозиция ~ 360 мВт, λ нм = 365 нм) через трубку из ПТФЭ и собирали в трубку объемом 5 мл (внутренний диаметр трубки = 0,3 мм, расстояние от лампы 3 см, длина трубки = 12 см; приблизительное время воздействия = 47 с).Перед УФ-облучением всю экспериментальную установку выдерживали в темноте, чтобы избежать спонтанной полимеризации. Собранные капли промывали один раз 4 мл гексана для разрушения эмульсии, а затем шарики трижды промывали 4 мл связывающего промывочного буфера (20 мМ Trizma-HCl pH 7,4, 50 мМ NaCl, 0,1% Tween 20) центрифугированием. при 3000 × г в течение 2 мин. Затем гранулы фильтровали с использованием нейлоновых фильтров Steriflip 20 мкм (Millipore, номер продукта: SCNY00020) и хранили в буфере для связывания-промывки с добавлением 1 мМ EDTA.В отличие от более ранних методов 35,54 , штрих-коды были построены на гранулах с использованием стратегии лигирования «разделить и объединить» 55 (дополнительный рис. 2). Для этого 250 мкл (~ 10 миллионов) гранулированных гранул промывали три раза 4 мл буфера для связывания-промывки путем центрифугирования при 3000 × g в течение 2 минут и подвергали первой стадии лигирования. Лигирование проводили в реакционном масштабе 2 мл с 1X T7 ДНК-лигазным буфером (New England Biolabs), адаптером дцДНК 4 мкМ с двумя разными липкими концами из 4 оснований, первый из которых комплементарен липкому концу из 4 оснований на шариках, и содержащий сайт рестрикции BclI и последовательность адаптера Read 2 Illumina (Oligo 12, вверху и Oligo 13, внизу, дополнительные данные 1), 30 ед / мкл ДНК-лигазы T7 (New England Biolabs, Product No.: M0318L) при комнатной температуре в течение 25 мин при перемешивании со скоростью 600 об / мин. Затем шарики промывали пять раз 4 мл буфера для связывания-промывки и осаждали после последней промывки. Для следующего этапа лигирования готовили мастер-микс (1,6 мл), содержащий 1 × буфер ДНК-лигазы Т7, 30 Ед / мкл ДНК-лигазы Т7, и делили на лунки 96-луночного планшета с глубокими лунками (16 мкл на лунка), предварительно заполненная 4 мкл 20 мкМ 1-го индекса штрих-кода (Индекс A) (Дополнительные данные 1), с другим индексом в каждой лунке. Эти индексы имели два разных липких конца из 4 оснований, первый из которых комплементарен свободному липкому концу олигонуклеотидов, лигированных на предыдущем этапе (дцДНК, олиго 12 и 13, дополнительные данные 1).Планшет герметично закрывали и инкубировали при 25 ° C со скоростью 600 об / мин в течение 25 минут. Затем лигазу инактивировали нагреванием при 65 ° C в течение 10 мин и содержимое всех лунок объединяли после добавления 200 мкл буфера для связывания-промывки, содержащего 1 мМ EDTA. После объединения гранулы промывали семь раз 4 мл буфера для связывания-промывки. Полный процесс разделения и объединения был повторен для лигирования 2-го (индекс B) и 3-го (индекс C) индексов штрих-кода (дополнительные данные 1), создавая общее разнообразие 8,8 × 10 5 (96 3 ) штрих-кодов. .После заключительного этапа объединения частично двухцепочечную последовательность лигировали со всеми гранулами с использованием одного и того же протокола лигирования (Oligo 14, вверху и Oligo 15, внизу, дополнительные данные 1). Эта последовательность включает липкий конец, комплементарный свободному липкому концу на 3-м индексе, и одноцепочечный 3′-выступ длиной 33 основания на другом конце (дополнительный рис. 2b). Из этих 33 нуклеотидов первые 8 являются случайными нуклеотидами, используемыми в качестве уникальных молекулярных идентификаторов (UMI) 56 , а оставшиеся 25 нуклеотидов, которые действуют как праймер для RT, комплементарны 3′-концу рибозима WXYZ и шпилечной РНК. репортер (оба содержат одну и ту же область связывания праймера).Конечную библиотеку шариков гидрогеля со штрих-кодом промывали пять раз 4 мл буфера для связывания-промывки с добавлением 1 мМ ЭДТА и ресуспендировали в том же буфере. (b) Инкапсуляция и слияние: гранулы со штрих-кодом (50 мкл) промывали пять раз 500 мкл буфера для связывания-промывки путем центрифугирования при 11866 × г в течение 1 мин. Затем промытые шарики смешивали с 2,5 мкл 10 мМ dNTP, 10 мкл 5-кратного реакционного буфера SuperScript III (Invitrogen), 2,5 мкл 100 мМ дитиотрейтола (DTT), 0,4% Tween 20 (10%), 100 единиц SUPERase۰In. TM ингибитор (Thermo Fisher Scientific, Product No.: AM2694) и инкубировали при 37 ° C в течение 30 минут для обеспечения диффузии всех реагентов внутри шариков. После этого шарики центрифугировали, как описано выше, и удаляли избыток жидкости над шариками. Затем при 4 ° C к гранулам добавляли 500 единиц обратной транскриптазы (SuperScript III, Thermo Fisher Scientific, номер продукта: 18080044) и 25 единиц рестрикционного фермента BclI (New England Biolabs, номер продукта: R0160L) и тщательно перемешать. Эти шарики гидрогеля вместе с другими реагентами были индивидуально инкапсулированы в капельки объемом ~ 50 мкл (дополнительный фильм 2), слитые с каплями РНК на том же микрофлюидном устройстве (дополнительные данные 3).Введение плотноупакованных деформируемых шариков, в результате чего> 99% капель содержат одну гранулу гидрогеля со штрих-кодом. Капельки, содержащие 5 мкл РНК, и капли, содержащие 50 мкл, были слиты в соотношении 1:10, чтобы гарантировать, что в большинстве случаев не более одного из первых слилось с одним из последних. Для этого потоки регулировались давлением с использованием, соответственно, 550, 225, 650, 450 мбар для шариков гидрогеля, 5 мкл капель, масла для контроля расстояния между каплями (HFE 7500 с 2% поверхностно-активного вещества) и масла для инкапсуляции шариков (HFE 7500 с 2% поверхностно-активного вещества). % поверхностно-активного вещества), в результате чего частота капель (50 мкл) составляет ~ 100 Гц.Электрокоалесценцию проводили, как описано выше. Слитые капли собирали в коллекторную пробирку объемом 0,2 мл (с крышкой из PDMS), содержащую масло с 2% поверхностно-активного вещества. (c) Синтез и экстракция кДНК: слитые капли затем инкубировали при 60 ° C в термоблоке в течение 1 часа для высвобождения штрих-кодов ДНК с использованием рестрикционного фермента BclI и выполнения синтеза кДНК в каплях. Эмульсию разрушали после инкубации путем добавления 2 объемов 1 H , 1 H , 2 H , 2 H -перфтор-1-октанола и 100 мкл воды.Затем объединенные кДНК со штрих-кодом осаждают изопропанолом и ресуспендируют в 40 мкл воды. ( E ) Подготовка образца для секвенирования: чтобы заблокировать удлинение недлинных праймеров, 20 мкл кДНК смешивали с 1 × реакционным буфером TdT (New England Biolabs), 0,25 мМ CoCl 2 , 0,4 мМ ddCTP (Roche CustomBiotech , Номер продукта: 12158183103) и 0,4 Ед / мкл терминальной трансферазы (TdT, New England Biolabs, номер продукта: M0315L). Реакцию проводили в объеме 50 мкл и инкубировали 30 мин при 37 ° C перед тепловой инактивацией при 70 ° C в течение 10 мин.КДНК, обработанные TdT, очищали с использованием магнитных шариков (AMPure XP, Beckman Coulter, номер продукта: A63881) в соответствии с протоколом производителя. Затем добавляли адаптеры для секвенирования с использованием двух последовательных этапов ПЦР (дополнительный рис. 3а). Первую ПЦР проводили в объеме, кратном 20 мкл, где 2 мкл реакции обратной транскрипции, обработанной TdT, смешивали с 0,5 мкМ Oligo 16 (также содержащего 6-нуклеотидный участок, используемый в качестве штрих-кода образца для мультиплексирования различных образцов для цикла секвенирования) и 0 .5 мкМ Oligo 17 (дополнительные данные 1) в качестве прямого и обратного праймеров в 1 × буфере для ПЦР (Thermo Scientific), 0,2 мМ dNTP, 0,01 ед / мкл полимеразы (Thermo Scientific Phusion Hot Start II, номер продукта: F459) с использованием следующий протокол: начальная денатурация 98 ° C / 30 секунд, затем 18 циклов денатурации 98 ° C / 10 секунд, отжиг и удлинение 72 ° C / 1 мин, и окончательное удлинение 72 ° C / 5 мин. Продукты ПЦР очищали с использованием магнитных шариков AMPure XP и элюировали 34 мкл воды. Вторую ПЦР выполняли, как указано выше, но в объеме 40 мкл с 4 мкл очищенного продукта ПЦР I в качестве матрицы, используя Oligo 18 и Oligo 19 (дополнительные данные 1) в качестве прямого и обратного праймеров и используя следующий протокол: начальная денатурация 98 ° C / 30 секунд, затем 10 циклов денатурации 98 ° C / 10 секунд, отжиг 56 ° C / 30 секунд, удлинение 72 ° C / 30 секунд и окончательное удлинение 72 ° C / 5 мин.Конечный образец очищали с использованием магнитных шариков AMPure XP, ресуспендировали в 34 мкл воды, анализировали на TapeStation (Agilent 2200 TapeStation, с использованием высокочувствительной ленты D1000 ScreenTape®, номер продукта: 5067-5584) и количественно оценивали с помощью набора Qubit® dsDNA HS Assay Kit. (Thermo Scientific, номер продукта: Q32854). Библиотеки секвенировали с использованием системы Illumina NextSeq 550 в режиме 2 × 150 High Output в Core Facility Genotyping and Sequencing Core Facility, ICM Paris (iGenSeq, Institut du cerveau et de la moelle épinière).

    Начальные комбинации фрагментов WXY

    24 начальных комбинации фрагментов WXY были определены расчетным путем путем случайного отбора среди 16 видов. Общее количество фрагментов WXY для распределения всех трубок (с возможной избыточностью) было установлено равным 50, что, как было обнаружено, с помощью вычислений максимизирует количество отдельных сетей, сформированных после случайного слияния капель (10 000 итераций). Как только это было исправлено, сетевое разнообразие было дополнительно увеличено на основе выбора назначения фрагмента (среди 100000 случайных реализаций), чтобы максимизировать разброс (энтропия Шеннона) ожидаемой скорости роста (первое собственное значение матрицы кинетических скоростей) и переходного времени (разница между первым и вторым собственным значением матрицы кинетических скоростей) распределения по сетям в результате моделирования 10000 случайных слияний капель.

    Обработка данных секвенирования

    Специальное программное обеспечение было написано для обработки данных секвенирования и дальнейших этапов анализа данных и доступно по адресу https://doi.org/10.5281/zenodo.4016905. Библиотеки секвенировали в режиме парных концов с чтением 1 и чтением 2 180 п.н. и 120 п.н. соответственно. Считывание 1 использовалось для определения штрих-кода образца (использованного для мультиплексирования образцов для секвенирования) и идентичности молекулы РНК (рибозим Azoarcus со специфической парой IGS-меток или репортер РНК шпильки).Считывание 2 использовалось для определения UMI 56 и штрих-кода капли. Структура чтения 1 и 2 представлена ​​на дополнительном рис. 3b. Нормализация UMI: четыре метаполя были связаны для каждой пары считываний: штрих-код образца, штрих-код капли, UMI и идентичность молекулы РНК (см. Ниже «Идентификация штрих-кода капли, UMI, IGS, тег и шпилька-репортер РНК по данным секвенирования»). Чтения без какого-либо из них были отброшены (~ 30%). Чтения с одинаковой метаинформацией были объединены, а счетчик чтения был добавлен в качестве дополнительного мета-поля.Это позволяет отфильтровывать шум из-за ошибок последовательности, учитывая, что количество считываний в результате таких ошибок значительно ниже (порог указан на дополнительном рисунке 3e). Пороги фильтрации для минимального количества считываний на UMI были определены отдельно для рибозимов Azoarcus и репортеров шпилечной РНК на основе формы распределения количества считываний на UMI (дополнительный рис. 3e-f). Полученный набор данных доступен по адресу https://doi.org/10.6084/m9.figshare.c.5103962. Окончательная обработка данных: отфильтрованные UMI-нормализованные чтения были затем сгруппированы по штрих-коду капли для подсчета количества UMI на тип молекулы РНК на штрих-код капли (дополнительный рисунок 3f). Для каждого штрих-кода капли сохранялись только репортеры шпилечной РНК, в которых UMI составляли ≥7,5% от общего количества UMI шпильки. Это пороговое значение было установлено для оптимального соответствия распределению слияния, измеренному с помощью видео (дополнительный рисунок 3g). В каждой капле отбрасывались последовательности рибозима, которые не соответствовали правильному репортеру шпильки.Затем сохранялись только штрих-коды в виде капель с более чем 10 UMI, связанными с репортерами шпилечной РНК, и 20 с рибозимами, и вычислялась доля каждого вида в сети. Как и раньше, эти пороги были выбраны для того, чтобы точно соответствовать наблюдаемому распределению плавления капель, определенному по видео, полученным во время экспериментов (дополнительный рис. 3, h и i). Обратите внимание, что пороговое значение 20 UMI рибозима на каплю обеспечивает более 89% вероятности того, что вид без обнаруженных UMI находится в диапазоне 0-0.1 бункер на рис. 1d (дополнительный рис. 3j). Для установления этой вероятности> 95% требуется пороговое значение 28 UMI рибозима на каплю. Измерения, которые не соответствуют последнему критерию, указаны в дополнительных данных 2. Состав обработанной сети и средние фракции частиц (фракция частиц — это доля частиц [катализатор WXYZ] по отношению к другим компонентам [катализаторы WXYZ] в сети): общедоступный для всех уникальных сетей (Дополнительные данные 2). Чтобы определить выход сети на каплю, сначала мы вычислили коэффициент конверсии UMI для конкретной капли в концентрацию, учитывая общие UMI-репортеры шпильки, а также количество различных идентифицированных репортеров шпильки.Затем это было использовано для преобразования общего количества UMI рибозима в значение урожайности.

    Контроль ошибок при секвенировании на уровне капель

    Ошибки при секвенировании на уровне капель могут возникать из-за электрокоалесценции более чем одной капли РНК с каплей, кодирующей штрих-код, и перекрестных переходов между двумя разными штрих-кодами капли во время этапов ПЦР. Для количественной оценки этого были приготовлены четыре эмульсии по 5 мкл (A, B, C и D), каждая из которых содержала: отдельную пару репортеров шпилечной РНК в конечной концентрации 5 нМ, набор из 4 рибозимов WXYZ с одинаковым IGS ( gAg, gCg, gUg и gGg), но в разных пропорциях (общие концентрации в сумме составляют 100 нМ) и 1.6 мкМ Z-фрагмента. Концентрации WXYZ в четырех наборах следующие; Набор A: 10 нМ WXYZ (GA), 20 нМ WXYZ (CA), 30 нМ WXYZ (AA), 40 нМ WXYZ (UA). Набор B: 1 нМ WXYZ (CC), 2,5 нМ WXYZ (AC), 5 нМ WXYZ (UC), 91,5 нМ WXYZ (GC). Набор C: 0,1 нМ WXYZ (CU), 0,25 нМ WXYZ (UU), 0,5 нМ WXYZ (AU), 99,15 нМ WXYZ (GU). Набор D: 0,01 нМ WXYZ (UG), 0,05 нМ WXYZ (CG), 65 нМ WXYZ (AG), 34,94 нМ WXYZ (GG). Четыре эмульсии были смешаны, а затем по отдельности слиты с каплями, содержащими шарики гидрогеля, как описано выше, для выполнения секвенирования на уровне капель.Данные были обработаны, как указано выше, с использованием той же стратегии определения порога. Мы количественно оценили смещение как долю капель, содержащих чистый (A, B, C или D), и сравнили его со смешанными популяциями (AB, AC, AD, BC, BD, CD, ABC, ABD, BCD и ABCD, дополнительный рис. . 5г).

    Экспериментальное измерение катализа нековалентными и ковалентными рибозимами

    Как и ранее, измерения каталитической силы 32 между парами IGS / tag были выполнены при 100 мМ MgCl 2 и различных концентрациях субстрата, чем использованные в этом исследовании, самосборки были повторно измеряли в 20 мМ MgCl 2 (присутствует в 1 × реакционном буфере, используемом здесь) для извлечения параметров автокаталитической скорости (см. ниже), используя стратегию, разработанную фон Кедровски 6 , как описано в ссылке. 32 . Концентрации фрагментов РНК поддерживали идентичными экспериментам с каплями (0,1 мкМ WXY и 1,6 мкМ Z-фрагмента). Для этого измеряли начальные скорости образования ковалентного WXYZ из фрагментов WXY и Z в зависимости от различных концентраций «допированных» ковалентных рибозимов WXYZ (с такими же IGS и меткой, что и у фрагмента WXY), добавленных в начале реакции. Для облегчения измерений также добавляли небольшие количества (0,001 мкМ) радиоактивно меченного фрагмента WXY (γ- 32 P).Эти радиоактивно меченные фрагменты WXY получали с использованием полинуклеотидкиназы Т4 (New England Biolabs) и γ- 32 P ATP (Perkin-Elmer). Для каждого начального условия (концентрация легированного катализатора WXYZ) были измерены зависимости от времени, чтобы получить начальную скорость образования ковалентного WXYZ из фрагментов WXY и Z. В соответствии с предыдущими измерениями 32 было обнаружено, что начальная скорость образования WXYZ ( v 0 ) линейно зависит от концентрации легированного WXYZ.Это аффинное соотношение можно описать следующим линейным уравнением \ (v_0 = \ alpha x + \ beta \) (дополнительный рис. 6, b и c), где x — концентрация ковалентного рибозима, α — наклон для пары IGS / tag, которая количественно определяет синтез WXYZ ковалентными рибозимами, и β представляет собой y-перехват, который количественно определяет синтез WXYZ нековалентными рибозимами (транскатализ нековалентным комплексом фрагментов WXY и Z) 30 . Также были измерены пары колебаний (GU и UG) и одна из несовпадающих пар IGS / тег (AG), и было обнаружено, что они имеют пренебрежимо малые значения для α и β (дополнительный рис.6в).

    Кинетическая модель

    В сети ковалентные катализаторы из разновидностей j , концентрация которых составляет x j , вносят вклад в скорость образования ковалентных катализаторов из разновидностей i с членом α ij x j , в то время как нековалентные катализаторы вносят вклад в постоянный член β ij . α ij и β ij членов были измерены экспериментально и независимо от сетевых экспериментов для одиночных пар IGS-тегов (дополнительный рис.6, б, в). Скорость производства каждого вида равна \ (\ dot x_i = \ mathop {\ sum} \ limits_j {\ alpha _ {ij} \ cdot x_j + \ beta _ {ij}} \), что приводит к системе линейных обыкновенных дифференциальных уравнения для каждой сети в зависимости от комбинаций IGS-тегов, полученных из фрагментов РНК. Эта модель делает два приближения. Во-первых, предполагается, что нековалентные комплексы образуются быстро по сравнению с ковалентным WXYZ и что вариации их концентрации не сильно влияют на кинетику. Вайдья и др. 30 определила прямую скорость 0,65 мкМ -1 мин -1 для образования комплекса. При концентрации Z-фрагмента 1,6 мкМ это дает характерное время ~ 1 мин для образования комплекса по сравнению с 1 ч для образования ковалентного продукта. Во-вторых, кинетика действительна в начале реакции, но не учитывает изменения концентрации субстрата. В частности, Z является общим ресурсом для всех видов, что может вызвать нелинейность кинетики.Однако Z предоставляется в избытке для всей сети и не сильно истощается, поскольку средний выход реакций составляет 17%, за исключением 16-членного, где он предоставляется в эквимолярной концентрации с общими фрагментами WXY. В этом случае следует отметить, что Z-фрагмент связывается со всеми фрагментами WXY с той же константой равновесия, поскольку вариации IGS-тега влияют только на связывание между WXY и WXYZ. Следовательно, ожидается, что Z-титрование повлияет на общую скорость накопления общего продукта, но не на относительную производительность между видами.

    Сводка отчетов

    Дополнительная информация о дизайне исследований доступна в Сводке отчетов по исследованиям природы, связанной с этой статьей.

    40 лет более чистого воздуха: эволюция автокатализатора

    Johnson Matthey Technol. Ред. , 2014, 58 , (4), 217

    В мае 2014 года исполнилось 40 лет со дня производства первой в мире коммерческой партии автокатализаторов для легковых автомобилей на заводе Johnson Matthey Plc в Ройстоне, Великобритания.Несмотря на огромный прогресс, достигнутый в сокращении выбросов загрязняющих веществ от транспортных средств с 1970-х годов, в последнее время также активно обсуждались уровни оксидов азота (NOx), особенно диоксида азота (NO 2 ) и твердых частиц (PM). в современной городской среде. В этой статье описывается эволюция каталитических технологий за последние сорок лет и следующее поколение продуктов, которые сделают возможным дальнейшее улучшение качества воздуха.

    Первоначальный прорыв

    Начиная с 1940-х годов в крупных городах, особенно в США и окрестностях Токио, наблюдался рост загрязнения воздуха.В 1950-х годах работа в Калифорнии доказала, что фотохимический смог образуется в результате реакций между NOx и углеводородами (УВ) (1) и что выхлопные газы двигателей внутреннего сгорания являются основным источником такого загрязнения (2). В Великобритании и США были приняты законы о чистом воздухе, а с 1968 года все новые легковые автомобили в США должны были соответствовать стандартам выбросов выхлопных газов. Первоначально это было достигнуто за счет улучшения настройки двигателя, но поправка, требующая дальнейшего снижения выбросов на 90% к 1975 году, вынудила использовать каталитические системы нейтрализации выхлопных газов.

    Джонсон Матти проводил исследования в этой области с 1969 года, а в 1971 году подал патент на платиновый катализатор, промотированный родием (3). Он использовался в «двустороннем» устройстве, предназначенном для удаления оксида углерода (CO) и выбросов углеводородов, вызванных неполным сгоранием топлива. Рециркуляция выхлопных газов использовалась для контроля выбросов NOx. Доказательство долговечности было критическим шагом на пути к принятию новой технологии. В 1972 году Джонсон Матти продемонстрировал властям США, что каталитическая система по-прежнему соответствует стандартам выбросов 1975 года после 26 500 миль езды на Chrysler Avenger (, рис. 1, ) (4), что помогло выдержать график введения законодательства.Параллельно с этим важным было внедрение бессвинцового бензина и керамических сотовых материалов, которые могли бы поддерживать высокотемпературные каталитические процессы.

    Рис. 1.

    (a) Испытательный автомобиль Chrysler Avenger; и (b) выбросы выхлопных газов, полученные с использованием системы контроля 1975 года при испытаниях на протяжении 26 500 миль. (o = выбросы на расстоянии 26 500 миль до обслуживания автомобиля, x = выбросы на расстоянии 26 500 миль после нормального обслуживания двигателя, во время которого катализатор не был затронут) (4)

    был разработан катализатор со слоем катализатора (4).Двигатель работал на богатой смеси, то есть с избытком топлива для создания восстановительных условий, и NOx восстанавливались до азота по первому катализатору. Вторичный воздух вводили в выхлопные газы для создания чистых окислительных условий перед вторым катализатором, который был разработан для окисления CO и HC до CO 2 и воды. Хотя эта система была эффективной, она снижала экономию топлива. Разработка кислородных датчиков в конце 1970-х годов позволила разработать системы управления двигателем с обратной связью, которые могли точно контролировать соотношение воздуха и топлива (AFR).Это позволило сбалансировать состав выхлопных газов в оптимальной точке для «трехкомпонентного» преобразования: одновременного окисления CO и HC и снижения NOx на одном катализаторе. Такие трехкомпонентные катализаторы (TWC) были необходимы для удовлетворения еще одного ужесточения ограничений выбросов в США, действующего с 1981 года.

    Разработка современных катализаторов

    Ранние конструкции TWC известны как предшественники сегодняшних бензиновых автокатализаторов. С тех пор произошли значительные улучшения в конструкции покрытия, применении металлов платиновой группы (МПГ), термической стабильности сырья и свойствах церийсодержащих материалов для хранения кислорода.Наряду с достижениями в двигателях и материалах, они позволили достичь более строгих пределов выбросов и целевых показателей долговечности для современных бензиновых автомобилей по всему миру, при этом потребляя значительно меньше МПГ.

    История выбросов в США и Японии была сосредоточена в первую очередь на бензиновых транспортных средствах, но в Европе, где законодательство о выбросах легковых автомобилей было введено в 1993 году, дизельные двигатели занимали значительную долю рынка. В тяжелых условиях эксплуатации также используются преимущественно дизельные двигатели.Катализаторы окисления дизельного топлива (DOC) были эффективны в удалении выбросов CO и HC, но сажа стала серьезной проблемой, особенно в местных зонах с низким уровнем выбросов. В 1990 году Джонсон Матти запатентовал использование NO 2 для снижения температуры сгорания дизельной сажи (5). Эта технология была запущена в качестве ловушки непрерывной регенерации (CRT ® ) в 1995 году, содержащей DOC для окисления CO и HC и образования NO 2 перед фильтром твердых частиц кордиерита (6). Это достигло большого успеха в качестве модернизированного устройства для контроля выбросов от местных автобусных и грузовых парков, а затем было внедрено в новые автомобили.Ограничения на содержание твердых частиц для дизельных легковых автомобилей не требовали установки фильтров до введения законодательства Евро 4 в 2005 году.

    Ограничение конструкции CRT ® заключалось в том, что каждая молекула NO 2 могла реагировать с углеродистой сажей только один раз. , требуя, чтобы двигатели работали с высоким соотношением NOx: PM. Включение пгм-содержащего покрытия в стенки фильтра, позволяющего повторно окислять «использованные» молекулы NO до NO 2 in situ , позволило значительно повысить эффективность регенерации фильтра при более низких соотношениях NOx: PM.Это было основой каталитического сажевого фильтра (CSF) (7), который сейчас широко используется в легких и тяжелых дизельных двигателях.

    Будущее более чистого воздуха

    По сравнению с автомобилями 1974 года, современные автомобили имеют гораздо более чистые и эффективные процессы сгорания, улучшенную конструкцию системы впрыска топлива и сложные системы управления двигателем и сенсорные технологии. В сочетании с передовыми катализаторными технологиями современный легковой автомобиль обычно выбрасывает в одну сотую меньше загрязнения, чем от до .1960. Однако влияние качества воздуха на здоровье человека, особенно в городской среде, занимает важное место в политической повестке дня. Многие европейские города нарушают ограничения Европейского Союза на NO 2 , что приводит к возобновлению дебатов о местных мерах по сокращению загрязнения (8). Европейское законодательство по выбросам из реального мира (RDE) находится в стадии подготовки с целью обеспечения того, чтобы загрязнение транспортных средств контролировалось в широком диапазоне стилей вождения и внешних условий, а не только в определенных ездовых циклах.Между тем загрязнение является серьезной проблемой во многих азиатских городах, например, Пекин рассматривает возможность введения все более жестких ограничений на выбросы.

    Внедрение дизельных сажевых фильтров на легковых дизельных (LDD) и тяжелых дизельных (HDD) транспортных средствах стало важным шагом на пути к решению этих проблем, поддерживаемых будущим законодательством по контролю количества выбрасываемых твердых частиц (а не только их общего количества). масса) от бензиновых двигателей с прямым впрыском топлива в Европе и аналогичного законодательства, ожидаемого для внедорожной мобильной техники.Селективное каталитическое восстановление (SCR) уже является широко используемой технологией для контроля выбросов NOx от ГНБ на развитых рынках. Кроме того, закон о легковых автомобилях Евро-6, вступивший в силу в сентябре 2014 года, более чем вдвое сократил допустимые выбросы NOx из двигателей с воспламенением от сжатия, что потребовало внедрения специальных технологий контроля NOx почти на всех новых европейских легковых автомобилях с дизельным двигателем.

    В настоящее время существуют две конкурирующие технологии контроля выбросов NOx в дизельном топливе: СКВ и адсорбирующие катализаторы NOx (NAC) (9), каждая из которых имеет свои преимущества и недостатки.Системы SCR, основанные на материалах из меди, железа или ванадия, восстанавливают NOx до азота за счет реакции с хранящимся аммиаком. Может быть достигнута высокая степень превращения NOx, и реакция протекает при стандартном дизельном топливе AFR, сохраняя экономию топлива. Однако аммиак образуется в результате разложения раствора мочевины, впрыскиваемого в выхлопной газ перед катализатором SCR. Это требует дополнительного резервуара для хранения, впрыска мочевины и системы управления, стоимость и требования к пространству для которых могут быть непомерно высокими для небольших транспортных средств.Пороговая температура разложения мочевины ~ . 180 ° C, ограничивает эффективность систем SCR в расширенных низкотемпературных режимах, например, при езде по городу зимой на низкой скорости. Также существуют опасения по поводу выброса излишка аммиака в атмосферу, что приводит к разработке дополнительных катализаторов проскока аммиака (ASC).

    NAC улавливают выбросы NOx во время нормальной работы, как правило, путем окисления более pgm и хранения в виде нитратов на щелочноземельных элементах, таких как барий.Поскольку NAC имеет ограниченную емкость накопления NOx, необходимо периодически регенерировать катализатор. Это достигается за счет работы двигателя на обогащенной смеси в течение нескольких секунд для увеличения концентрации восстановителей, включая CO, HC и водород, в выхлопных газах. В богатых условиях нитрат разлагается, и высвободившиеся частицы NOx превращаются в азот в результате реакции с восстановителями выхлопных газов над вторым каталитическим компонентом, обычно на носителе из родия. Периодическое требование обгонять двигатель усложняет конструкцию трансмиссии и ухудшает топливную экономичность, что нежелательно с учетом законодательных целей по сокращению выбросов CO 2 / повышению топливной экономичности.Дополнительная стоимость МПГ ​​может быть проблемой для более крупных транспортных средств. Кроме того, существует температурное окно, в котором NAC работают эффективно: при более высоких температурах механизм накопления менее стабилен, а при более низких температурах реакции выделения и восстановления NOx менее эффективны.

    Для решения проблемы контроля NOx для RDE на дизельных легковых автомобилях вероятным решением является комбинация систем NAC и SCR, использующих сильные стороны каждой технологии. NAC, расположенный выше по потоку, будет накапливать выбросы NOx при низких температурах, когда система SCR менее эффективна.NAC также будет действовать как катализатор окисления для преобразования выбросов HC и CO. Система SCR ниже по потоку обеспечит контроль NOx при более высоких скоростях и более высоких температурах, а также обеспечит расширенную работу на обедненной смеси для повышения экономии топлива. В настоящее время проводится оптимизация таких систем с упором на согласование рабочих температурных окон компонентов NAC и SCR.

    По мере того, как двигатели становятся все более экономичными, меньше тепла попадает в выхлопные газы. Это серьезная проблема для системы последующей обработки, поскольку это приводит к более низким рабочим температурам катализатора.Обычная архитектура дизельного катализатора включает DOC, за которым следуют CSF, впрыск мочевины и SCR. Из-за тепловой массы CSF (необходимой для противостояния неконтролируемой регенерации сажи) и потерь тепла из выхлопной трубы в зоне смешения мочевины перед SCR, может потребоваться много минут езды по городу, прежде чем SCR прогреется достаточно, чтобы обеспечить высокий уровень эффективности преобразования. Элегантным решением является нанесение покрытия SCR на фильтр для улавливания твердых частиц (10), что позволяет покрытию SCR быстрее нагреваться и становиться активным, а также повышает компактность системы (, рис. 2, ).Такие технологии SCR с покрытием на фильтре (SCRF ® ) сейчас находятся в серийном производстве — еще одна первая в мире компания Johnson Matthey, Royston. Проблемы проектирования включают введение значительно более высоких нагрузок покрытия на фильтр, чем требовалось для CSF, что приводит к требованию для подложек фильтров с высокой пористостью и оптимизации эффективности фильтрации и характеристик падения давления.

    Рис. 2.

    Схема, демонстрирующая, как SCRF ® улучшает компактность системы, и пример того, как в течение европейского ездового цикла он нагревается быстрее, чем SCR после CSF (из-за его более близкой близости к двигатель), обеспечивающий более раннюю конверсию NOx

    Выводы

    С момента разработки первых каталитических нейтрализаторов за последние сорок лет было сделано много достижений в технологиях трансмиссии, подложек и катализаторов.Системы контроля выбросов теперь необходимы в странах по всему миру, и они предотвратили попадание миллиардов тонн загрязняющих веществ в атмосферу. Однако загрязнение NOx и PM продолжает влиять на здоровье человека, особенно в городской среде. Внедрение новых технологий для контроля выбросов NOx в дизельном топливе, наряду с более широким использованием сажевых фильтров, приведет к дальнейшему улучшению качества воздуха.

    Произошла ошибка при настройке пользовательского файла cookie

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности.Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


    Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

    Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно. Ниже приведены наиболее частые причины:

    • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки вашего браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
    • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались.Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, используйте кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
    • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
    • Дата на вашем компьютере в прошлом. Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г.,
      браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
    • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie.Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с системным администратором.

    Почему этому сайту требуются файлы cookie?

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie
    потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


    Что сохраняется в файле cookie?

    Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

    Как правило, в cookie-файлах может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта. Например, сайт
    не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к
    остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

    .

    Related Post

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *